化學試劑亞甲基藍
Chemical reagent
Methylene blue
分子式：C16H18N3SCl·3H2O
相對分子質量：373.90
1 范圍
本標準規定了化學試劑亞甲基藍的性狀，技術要求、試驗方法，檢驗規則和包裝及標志。
本標準適用于化學試劑亞甲基藍的檢驗。
2 規范性引用文件
下列文件對本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅注日期的版本適用于本文件。
凡不注日期引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本標準。
GB/T 603-2002 化學試劑 試驗方法中所用制劑及制品的制備
GB/T 6682-2008 分析實驗室用水規格和試驗方法
GB/T 9721-2006 化學試劑 分子吸收分光光度法通則（紫外和可見光部分）
GB/T 9741-2008 化學試劑 灼燒殘渣測定通用方法
GB 15346-2012 化學試劑 包裝及標志
HG/T 3921-2006 化學試劑 采樣及驗收規則
3 性狀
化學試劑亞甲基藍為深綠色結晶或深褐色結晶性粉末，難溶于冷水及醇，加熱后則易于溶解。
4 技術要求
化學試劑亞甲基藍的技術要求見表1
指示劑 生物染色劑
含量,w/% ≥ 82.0 80.0（內控）
吸收特性 合格 —
質量吸收值(1%) 2200-2750 —
生物染色試驗 — 合格
干燥失重,w/% ≤ 15.0 15.0
灼燒殘渣(硫酸鹽),w/% ≤ 0.5 0.5
乙醇溶解試驗 合格 合格
變色試驗 合格 —
5 試驗方法
本試驗方法中，除另有規定外，制劑及制品，均按GB/T 603-2002 的規定制備，實驗用水應符合GB/T6682-2008 中三級水規格，樣品均按精確至0.01g 稱量 。本標準中所用溶液以“%”表示的均為質量分數。修約結果與指標值保持一致。
5.1 含量
5.1.1 儀器
分光光度計的波長、吸光度的準確性應符合GB/T 9721-2006 的規定
5.1.2 測定條件
波長：663nm-667nm；
吸收池厚度：1cm；
參比溶液：水。
5.1.3 測定方法
稱取（5.4）項測定后的樣品75mg，稱準至0.0002g，移入500mL 容量瓶中，并用水稀釋至刻度，搖勻。準確吸取2.0mL 樣品溶液，置于100mL 容量瓶中，用水稀釋至刻度，搖勻，取該溶液按5.1.2規定的測定條件測定吸光度。
5.1.4 測定結果
亞甲基藍的質量分數w，數值以“%”表示，按式(1)式計算：
A
w ＝ ────── ×100--------------（1）
0.787
式中：
A─樣品溶液的吸光度；
0.787─標樣溶液的吸光度。
5.2 吸收特性
5.2.1 儀器
分光光度計的波長、吸光度的準確性應符合GB/T 9721-2006 的規定。
5.2.2 測定條件
波長：λ max－15nm、λ max＋15nm(λ max＝664-666nm)
吸收池厚度：1cm；
參比溶液：水。
5.2.3 測定方法
將5.1.3 中測吸光度的樣品溶液，分別測在λ max－15nm 及λ max ＋15nm 的吸光度。λ max－15nm處的吸光度與λ max＋15nm 處的吸光度之比應在1.21 到1.70 之間。
5.3 質量吸收值
5.3.1 儀器
分光光度計的波長、吸光度的準確性應符合GB/T 9721-2006 的規定。
5.3.2 測定條件
同5.1.2。
5.3.3 測定方法
同5.1.3。
5.3.4 測定結果
質量吸收值按式（2）計算：
A
X＝───── ----------------（2）
3×10-4
式中：
X ─ 質量吸收值；
A ─ 樣品溶液的吸光度；
3×10-4 ─ 以1%為單位的樣品濃度。
5.4 生物染色試驗（任選下列任一項試驗完成）
5.4.1 Plsohinger 氏緩沖亞甲基藍法
取含尼氏小體的新鮮神經組織材料，固定于乙醇溶液(95%)中，石臘包埋。將[HAc]=1mol/L 溶液1.0mL；[NaAc]=1mol/L 溶液1.0mL；亞甲基藍0.064g；蒸餾水100ml 混合。配制成染色溶液。
將[HAc]=1mol/L 溶液1.0mL，[NaAc]=1mol/L 溶液1mL，蒸餾水100mL 混合。配制成洗液。切片脫臘入染色液10min，染色后用洗液沖洗；以4%鉬酸銨水溶液固定染色數分鐘；蒸餾水沖洗，乙醇脫水，二甲苯透明，香膠封固；
鏡檢結果：尼氏小體呈藍色。
5.4.2 Methylene blue—phloxine 對比染色取新鮮組織材料以Zenker 氏固定液固定，石臘包埋；切片脫臘入0.3%亞甲基藍溶液2min—3min；洗盡切片上的染料，酸化數秒鐘（適量3%鹽酸浸潤）；放入0.5%熒光桃紅溶液1min—2min；沖洗切片上染料，乙醇脫水，二甲苯透明，封固；染色結果：細胞核應呈藍色，細胞質應呈紅色。
5.4.3 白喉桿菌及牛乳中的細菌進行染色檢驗
以白喉患者喉部做出培養并制成涂片。
用同一樣品配成以下三種溶液：（1）Loeffler 氏液：亞甲基藍0.3g，乙醇溶液(95%)30mL，0.01%KOH100mL。
(2)亞甲基藍乙醇水溶液：方法同前但用蒸餾水代替0.01%KOH。
(3)1%亞甲基藍溶液。
涂片依次入三種溶液染色數秒鐘，然后水洗，吸干；染色結果：亞甲基藍樣品能使菌體中的顆粒染上藍色。作Wright 氏染色劑進行染色時，對血像中的Ｗ.Ｂ.Ｃ形態染色清晰。
5.5 干燥失重
稱取1g 樣品，稱準至0.0002g，置于已在105℃±2℃恒重的稱量瓶中，于105℃±2℃干燥至恒重。干燥失重的質量分數w1，數值以“%”表示，按式（3）計算：
m1-m2
w1 = ───── × 100-------------（3）
m1
式中：
m1-恒重前樣品的質量，g；
m2-恒重后樣品的質量，g。
5.6 灼燒殘渣
稱取1g 樣品，置于已在650℃±50℃恒重的瓷坩堝中，緩緩加熱至樣品炭化，冷卻，再加1mL 硫酸濕潤，繼續加熱至硫酸蒸汽逸盡，在650℃±50℃的高溫爐中灼燒至恒重，灼燒殘渣質量分數w 按GB/T9741-2008 的規定計算。
5.7 乙醇溶解試驗
稱取0.1g 樣品，溶于100mL 乙醇溶液(95%)中，樣品應全部溶解，無機械雜質。（保留溶液）
5.8 變色試驗
5.8.1 試劑和溶液
取1mL 三氯化鈦原液用9mL 鹽酸溶液(10%)稀釋。
5.8.2 測定方法
吸取5.7 項測定后溶液3-4 滴，加水稀釋至10mL，滴加三氯化鈦溶液數滴，溶液應從藍色變為無
6 檢驗規則
按HG/T 3921-2006 的規定，進行采樣及驗收。
7 包裝及標志
按GB 15346-2012 的規定進行包裝，并給出標志，其中：
內包裝形式：NBY-4、NBY-5；
外包裝形式：WB-1、WB-2；
包裝單位：第2、3 類
或按客戶要求包裝。