高效液相色譜法測定硫代水楊酸

摘 要：應用乙腈/0.5%高氯酸的體積比率為35:65為流動相，在Kromasil色譜柱上，以苯甲酸為內標，建立了以鄰氨基苯甲酸為原料合成硫代水楊酸的高效液相色譜分析方法.硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸的相對標準偏差分別為0.19%，0.97%，硫代水楊酸的進樣量在0.1～5.0μg內呈良好的線性關系(r=1.000)， 鄰氨基苯甲酸的進樣量在0.3～15.0μg內呈良好的線性關系(r=0.9999).

關鍵詞: 高效液相色譜　硫代水楊酸　鄰氨基苯甲酸　苯甲酸

硫代水楊酸是白色或淺黃色針狀結晶或結晶性粉末，主要用作生化試劑，也可作為精細化工中間體和特殊染料的原料.目前，國內外有關硫代水楊酸含量測定的儀器分析方法較少，有文獻報導采用甲醇/水體系進行液相色譜分析，本文選用乙腈/0.5%高氯酸的體積比率為35:65為流動相，在Kromasil色譜柱上，以苯甲酸為內標，建立了以鄰氨基苯甲酸為原料合成的硫代水楊酸的高效液相色譜分析方法，能同時對硫代水楊酸和雜質鄰氨基苯甲酸進行測定，分離效果好，操作簡單，分析速度快，定量準確， 硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸的相對標準偏差分別為0.19%，0.97%，符合定量分析要求.

1 實驗部分
1.1 儀器
日本島津ＬＣ－９Ａ型高效液相色譜儀;
Spd-6AV紫外可見分光光度檢測器;
C-R6A色譜數據處理機;
DGU-4A型超聲波脫氣機;
20μL定量進樣器.

1.2 試劑
硫代水楊酸標準樣品：含量≥99.99%；
鄰氨基苯甲酸標準樣品:含量≥99.99%;
苯甲酸: 分析純; 
高氯酸：分析純；
內標溶液: 稱取苯甲酸約5g于100mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻.
標準溶液: 稱取硫代水楊酸標準樣品約0.1g(精確到0.0002g)和鄰氨基苯甲酸約0.3g (精確到0.0002g)于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，在超聲波清洗機中振蕩，使之完全溶解，準確移入10.00mL內標溶液，用甲醇定容，搖勻.
乙腈為色譜純，甲醇為分析純，水為二次蒸餾水， 流動相在使用前需經0.45μm濾膜過濾.

1.3 高效液相色譜分析條件
    色譜柱：Kromasil C18（150mm×4.6mmi.d.）;
流動相: 乙腈/0.5%高氯酸的體積比率為35:65，流速1.0mL/min;
紫外檢測波長:254nm;
柱溫:40℃.

1.4 試驗方法
稱取樣品約0.1g (精確到0.0002g)于100mL容量瓶中，加入50mL甲醇，在超聲波清洗機中振蕩，使之完全溶解，準確移入10.00mL內標溶液，用甲醇定容，搖勻.
待儀器穩定后，采用內標法進行色譜分析，分析結果由色譜數據處理機自動處理.

2 結果與討論
2.1 樣品溶劑的選擇
    硫代水楊酸產品不溶于水和乙腈，能溶于甲醇，N，N-二甲基甲酰胺，氫氧化鈉水溶液.試驗表明: 甲醇作溶劑能完全溶解樣品，且分析純甲醇在本方法檢測波長下無紫外吸收，不含干擾測定的雜質，因此選擇甲醇作為樣品溶劑.

2.2 流動相的選擇
由于硫代水楊酸存在解離作用，在色譜柱上保留值小，與雜質的分離效果不好，所以加入高氯酸抑制硫代水楊酸的解離，增加其在色譜柱的保留值，改善分離情況.改變乙腈-水-高氯酸配比，考察樣品中硫代水楊酸與鄰氨基苯甲酸等雜質的分離情況.試驗表明: 乙腈-水-高氯酸體系中當乙腈/0.5%高氯酸的體積比率為35:65時，樣品峰與雜質峰已完全分離，且分析速度快. 因此選擇體積比率為35:65的乙腈/0.5%高氯酸為流動相.

2.3 內標物的選擇
為了選擇合適的內標物，試用了鄰苯二甲酸，苯甲酸，鄰氯苯甲酸等化合物.試驗表明: 苯甲酸的保留值與硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸的保留值較接近，分離情況見圖一，且分析純苯甲酸不含干擾測定的雜質，因此選擇苯甲酸作為樣品的內標物.


圖一 樣品與內標物分離色譜圖
1-硫代水楊酸  3-鄰氨基苯甲酸  2-苯甲酸

2.4 檢測波長的選擇
    以甲醇為參比，將硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸于紫外可見光譜儀上在400～190nm范圍內分別進行掃描.結果表明: 硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸均有較強的紫外吸收，為保證樣品的靈敏度和減少雜質的背景吸收不干擾測定，因此選擇檢測波長為硫代水楊酸的次靈敏吸收波長254nm，此波長下分析純苯甲酸不含干擾測定的雜質，，且硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸均有較好的靈敏度.

2.5 線性關系
以甲醇為溶劑，配置硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸的標準系列， 硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸的濃度分別為:0.1，0.5，1，3，5mg/mL; 0.3，1.5，3，9，15mg/mL; 0.5，2.5，5，15，25mg/mL，各進樣1μL，記錄對應峰面積.將峰面積(y)與進樣量(x)之間進行線性回歸法處理，分別得到以下回歸方程:
硫代水楊酸:    y=16169x+69(r=1.000)
鄰氨基苯甲酸:  y=5741x+42(r=0.9999)
苯甲酸:        y=3726x-36(r=0.9998)
   
 結果表明: 硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸，苯甲酸的進樣量在0.1～5.0μg， 0.3～15.0μg ，0.5～25.0μg范圍內呈良好的線性關系.
2.6 加入回收試驗
將硫代水楊酸，鄰氨基苯甲酸標準品加入到試樣中，測定回收率，結果見表一.回收率符合符合定量分析要求.
表 一
試樣號      加入，mg                    回收，mg            回收率，%
  硫代水楊酸 鄰氨基苯甲酸 硫代水楊酸 鄰氨基苯甲酸 硫代水楊酸 鄰氨基苯甲酸
1  　0.1086     0.0501 　　 0.1083 　 0.0496           99.72          98.95
2 　 0.2013     0.1026 　　 0.1998      0.1040           99.26  　　 101.34
3  　0.3049     0.1471 　　 0.3055      0.1479          100.21        100.56
4  　0.4026     0.2156  　　0.4001  　 0.2140     　  99.38       　99.27
5      0.5011    0.2478        0.4984      0.2499           99.46        100.85

2.7 精密度試驗
應用本測定方法對硫代水楊酸產品進行多次分析，結果見表二，測定的精密度符合定量分析要求.
表 二
                  測定結果，%             平均值，%      
     硫代水楊酸  鄰氨基苯甲酸 硫代水楊酸  鄰氨基苯甲酸
       93.62           0.820
       93.78           0.818
       93.56           0.798
       93.38           0.809           93.56          0.811
       93.45           0.816
       93.86           0.801
       93.44           0.809
       93.38           0.814
                            標準偏差，%                     相對標準偏差，%
        硫代水楊酸    鄰氨基苯甲酸    硫代水楊酸 鄰氨基苯甲酸
          0.18              0.0079             0.19            0.97

3 結論
    本方法對以鄰氨基苯甲酸為原料合成的硫代水楊酸的高效液相色譜分析方法進行研究，對色譜條件和方法的穩定性、重現性等進行試驗。通過加入回收試驗，硫代水楊酸平均回收率達99.60％，且數據的穩定性和重現性較好，驗證了本方法的可靠性。
    本方法操作方便、快速，并具有較高的靈敏度，可作為硫代水楊酸產品的測試方法。

4 參考文獻
1 Procopio，Jesus.R;Hernandez，Cucas.J.Chromatogr.1993，653(2)，267-73(Eng).
2 Procopio，Jesus.R;Da silva，M.pilar;Carmen Talanta 1992，39(12)，1619-23(Eng)
3 張玉奎，張維冰，鄒漢法.分析化學手冊 第六分冊.北京:化學工業出版社，2000.21