試驗方法
1方法提要
2-羥基-6-氯喹喔啉的分析采用高效液相色譜法, 試樣用N,N-二甲基甲酰胺溶解, 以甲醇+水為流動相, 使用以KromasilC-18為填料的不銹鋼柱和紫外檢測器, 在254 nm檢測波長下對2-羥基-6-氯喹喔啉進行高效液相色譜分離和測定,采用外標法定量。

2　試劑和溶液
N,N-二甲基甲酰胺;甲醇, 色譜純;水, 新蒸二次蒸餾水, 經濾膜過濾;2-羥基-6-氯喹喔啉標樣, 已知質量分數≥98.0%。

3　儀器
高效液相色譜儀, 具有可變波長紫外檢測器;色譜柱, 200 mm×4.6 mm不銹鋼柱, 內裝KromasilC-18填充物, 粒徑5 μm;超聲波清洗器;過濾器,濾膜孔徑約0.45 μm;微量進樣器, 50 μL。

4　色譜操作條件流動相, 甲醇+水(V(甲醇)∶V(水)=700 ∶300), 超聲20 min備用;流速, 0.6 mL/min;柱溫, 35℃;檢測波長, 254 nm;進樣體積, 5 μL;保留時間5.8min。
上述操作參數是典型的, 可根據儀器的不同特點對給定操作參數做適當調整, 以期獲得最佳效果。

5　測定步驟
5.1　標樣溶液的配制
稱取2-羥基-6-氯喹喔啉標樣0.05 g(精確至0.000 02 g)置于50 mL容量瓶中, 用N,N-二甲基甲酰胺溶解并用流動相稀釋至刻度, 搖勻, 用移液管移取2 mL于50 mL容量瓶中, 流動相稀釋至刻度, 搖勻備用。

5.2　試樣溶液的配制

稱取2-羥基-6-氯喹喔啉0.05 g(精確至0.000 02 g), 置于50 mL容量瓶中, 用N,N-二甲基甲酰胺溶解, 并用流動相稀釋至刻度, 搖勻, 用中同一支移液管移取2 mL于50 mL容量瓶中, 用流動相稀釋至刻度, 搖勻備用。

5.3　測定
在上述操作條件下, 待儀器基線穩定后, 連續注入數針標樣溶液, 計算各針響應值重復性, 待相鄰兩針響應值相對變化小于1.5%, 按標樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標樣溶液的順序進行測定。

5.4　計算
將測得的兩針試樣溶液以及試樣前后兩針標樣
溶液中2-羥基-6-氯喹喔啉的峰面積進行平均。
試樣中2-羥基-6-氯喹喔啉的質量分數w按下式計算:
w=100×(A2 ×m1 ×P)/A1 ×m2

式中:
A1 —標樣溶液中2-羥基-6-氯喹喔啉峰面積的平均值, mV;
A2 —試樣溶液中2-羥基-6-氯喹喔啉峰面積的平均值, mV;
m1—標樣的質量, g;
m2—試樣的質量, g;
P—標樣中2-羥基-6-氯喹喔啉的質量分數, %。
5.5　允許差
兩次平行測定結果之差, 應不大于0.7%, 取其算術平均值作為測定結果。