O-甲基異脲的合成有以下兩種方法。
(1)硫酸二甲酯法
(2)氰胺法

工業上一般采用硫酸二甲酯法。在500L反應釜中投入250kg硫酸二甲酯，攪拌加熱到80℃，然后分批、少量地加入120kg尿素，反應放熱，小心控制加料速度，使反應溫度不超過100℃，加完后在90℃保持1h，冷卻到50～60℃，出料，得到約370kg無色黏稠狀液體，即O-甲基異脲的硫酸氫鹽。