附錄A
（規范性附錄）
梔子苷檢測方法
A.1梔子苷的測定
A.1.1試劑和材料
所需試劑和材料如下：
——乙腈：色譜純；
——梔子苷標準品：質量分數≥99%。
A.1.2儀器和設備
高效液相色譜儀：配紫外檢測器（檢測波長238nm）。
A.1.3色譜條件
所需色譜條件如下：
——色譜柱：ODSC18，4.6mm×25cm，粒度5μm；或其他等效的色譜柱；
——流動相：乙腈∶水=15∶85；將150mL色譜純乙腈與850mL水混合均勻后，用0.45μm濾膜過濾，超聲脫氣后備用；
——柱溫：40℃；
——流速:0.7mL/min；
——進樣量：10μL。
A.1.4測定步驟
A.1.4.1梔子苷標準曲線的制備
稱取約0.01g梔子苷標準品（精確至0.0001g），用流動相（乙腈水溶液）溶解并定容至50mL，得到標樣貯存液A。吸取0.25mL、0.75mL、1.25mL、2.0mL、2.5mL貯存液A，分別用流動相（乙腈水溶液）稀釋并定容至50mL，得到5個標樣。在A.1.3參考色譜條件下，對梯度濃度的標樣進行測定，重復實驗兩次，得到標樣平均峰面積值。以標樣峰面積為縱坐標，標樣的梔子苷質量濃度（g/mL）為橫坐標，做標準曲線。
A.1.4.2試樣液的制備
稱取適量試樣（精確至0.0001g），用流動相（乙腈水溶液）溶解并定容至50mL，所得溶液用0.45μm濾膜過濾，濾液備用。
A.1.4.3測定
技術指標1的測試方法文件

在A.1.3參考色譜條件下，對試樣液進行測定，根據梔子苷標準品的保留時間定性。
重復進樣一次，得到梔子苷平均峰面積值。根據標樣峰面積和標樣的梔子苷質量濃度之間的線性關系，得到試樣液中梔子苷的質量濃度（g/mL）。若試樣液中梔子苷濃度（g/mL）不在標準曲線范圍內，則應調整試樣液的濃度或者重新設計標準曲線。
A.1.4.4結果計算
試樣中梔子苷的含量X1按公式（1）計算：
              C1
X1=------------×100%…………………………（1）
              C2
式中：
X1——試樣中梔子苷的含量，%；
c1——根據標準曲線求得的梔子苷濃度，單位為克每毫升（g/mL）；
c2——試樣液的濃度，單位為克每毫升（g/mL）。
實驗結果以平行測定結果的算術平均值為準。在重復性條件下獲得的兩次獨立測定結果的絕對差值不大于0.1%。