方法名稱 體外培育牛黃－膽酸的測定－薄層掃描法
儀器設備：
1 儀器
1.1薄層掃描儀
1.2涂布器
應能使吸附劑在玻璃板上手工或自動涂成一層符合厚度要求的均勻薄層。
1.3點樣器
一般采用微升毛細管或與之相應的點樣器材。
1.4展開室
可用適合薄層板大小的專用玻璃缸，底部平底或雙槽，蓋子須密閉。
2 材料
2.1玻板
用10cm×10cm、10cm×15cm、20cm×10cm或20cm×20cm的規格，要求光滑、平整，洗凈后不附水珠，晾干。
2.2吸附劑
硅膠g，其顆粒大小一般要求直徑為10～40μm。
試樣制備： 1. 對照品溶液的制備
取在105℃干燥至恒重的膽酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作為對照品溶液。
2. 供試品溶液的制備
取本品細粉0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，蒸干，殘渣加20%氫氧化鈉溶液10ml，加熱回流2小時，冷卻，加稀鹽酸19ml調節ph值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），提取液均用同一鋪有少量無水硫酸鈉的脫脂棉濾過，濾液合并，回收溶劑，殘渣用甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
應用范圍
本方法采用薄層掃描法測定體外培育牛黃中膽酸的含量。
本方法適用于牛科動物牛bos taurus domesticus gmelin的新鮮膽汁作母液，加入去氧膽酸、膽酸、復合膽紅素鈣等制成的體外培育牛黃的測定。
方法原理
供試品加甲醇超聲提取，放冷，補重，搖勻，濾過，續濾液加20%氫氧化鈉溶液加熱回流，調ph值至酸性，用乙酸乙酯提取，提取液蒸干，殘渣加甲醇溶解，制成供試液，點樣、展開，以30%硫酸乙醇溶液顯色，用薄層掃描儀進行掃描，于波長λs=380nm，λr=650nm測量膽酸（c24h40o5）吸收度積分值，計算其含量。
試劑
1. 乙酸乙酯
2 .20%氫氧化鈉溶液
3 .甲醇
4 .30％硫酸乙醇溶液
試樣制備
1. 對照品溶液的制備
取在105℃干燥至恒重的膽酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液，作為對照品溶液。
2. 供試品溶液的制備
取本品細粉0.2g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，蒸干，殘渣加20%氫氧化鈉溶液10ml，加熱回流2小時，冷卻，加稀鹽酸19ml調節ph值至酸性，用乙酸乙酯提取4次（25ml，25ml，20ml，20ml），提取液均用同一鋪有少量無水硫酸鈉的脫脂棉濾過，濾液合并，回收溶劑，殘渣用甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為供試品溶液。
注：“精密稱取”系指稱取重量應準確至所稱取重量的千分之一。“精密量取”系指量取體積的準確度應符合國家標準中對該體積移液管的精度要求。
操作步驟
1. 薄層板制備
將吸附劑1份和水3份在研缽中向一方向研磨混合，去除表面的氣泡后，倒入涂布器中，在玻板上平穩地移動涂布器進行涂布（厚度為0.25～0.5mm）取下涂好薄層的玻板，于室溫下，置水平臺上晾干，在反射光及透射光下檢視，表面應均勻，平整，無麻點、無氣泡、無破損及污染，于110℃烘30分鐘，冷卻后立即使用或置干燥箱中備用，或用商品預制板。
2. 點樣
精密吸取供試品溶液 2μl、對照品溶液 1μl與 3μl，分別交叉點于同一硅膠g薄層板上，如用點樣器點樣到薄層板上，一般為圓點，點樣基線距底邊1.0～1.5cm，樣點直徑一般不大于2mm，點間距離可視斑點擴散情況以不影響檢出為宜。點樣時必須注意勿損傷薄層表面。
3. 展開
將點好樣品的薄層板放入展開缸的展開劑中，以異辛烷一乙酸丁酯一冰醋酸一甲酸（8：4：2：1）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以30%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點清晰，取出。
4. 含量測定
在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板，周圍用膠布固定，選擇反射方式，采用吸收法，進行掃描，波長：λs=380nm，λr=650nm，測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值，計算。
用外標法測定時，若對照品各數據點在校正曲線上呈一通過原點的直線時，可用一點法校正，如不通過原點通常宜采用二點法校正，必要時用多點法校正。