IPTG作活性誘導物質時如何使用
IPTG作為一種活性誘導物質通常不直接使用,而是要配置成水溶液,再進行相關的處理之后,再進行具體的應用。這樣一方面使得IPTG具有更好的穩定性,另一方面也使得其在應用中能均勻接觸培養基。IPTG是一種作用極強的誘導劑,不被細菌代謝而十分穩定,因此被實驗室廣泛應用。在使用中,首先把IPTG配制成23.83 mg/ml(100 mM)的水溶液,并進行過濾除菌后保存。然后在100 ml的瓊脂培養基中,加入100 μl的上述溶液、200 μl的X-Gal(20 mg/ml的二甲基甲酰胺(DMF)溶液)和100 μl的Amp(100 mg/ml),制作成IPTG、X-Gal、Amp平板培養基。當DNA片段插入至pUC系列載體(或其他帶有lacZ、Amp基因載體),然后轉化至lacZ缺失細胞中后,涂布上述的IPTG、X–Gal、Amp平板培養基,可根據長出菌體的藍白色,而方便地挑選出基因重組體(白色為具有DNA插入片段的基因重組體)。