生物胺檢測方法
胺的分析方法包括HPLC、TLC和酶聯免疫分析等。組胺等生物胺含有-NH2能形成氫鍵,所以常用的方法是HPLC-FLD、HPLC-UV。國內沒有同時測定多種生物胺(8種以上)的檢測方法。
1國內文獻有關生物胺的測定方法
采用高效液相色譜法,以1,6-己二胺為內標,測定柿子中的精胺、亞精胺、尸胺和腐胺。樣品經丹磺酰氯衍生,硅膠柱凈化,LichrosorbNH2柱(5µm,200mm×4.0mm)分離后,以氯仿:乙酸乙酯:三乙胺(98.4:1.5:0.1)為流動相,流速為1.5mL•min-1,熒光檢測器檢測。激發波長為336nm,發射波長為495nm,精胺、亞精胺、尸胺和腐胺的線性相關系數均大于0.99,其回收率分別為98.99%、94.02%、96.46%和105.44%。生物胺定量檢測限1—5mg•kg-1
2國外文獻有關生物胺的測定方法
2.1 7-氟-4-硝基苯并二唑柱前衍生/毛細液相色譜-串聯質譜法測定生物胺
用7-氟-4-硝基苯并二唑(NBD)柱前衍生/毛細液相色譜-串聯質譜法測定生物胺。生物胺包括色胺、組胺和胍丁胺,進行衍生反應后,在毛細柱(20m*0.25mmC85μm)上分離,選擇電噴霧離子化,碰撞誘導解離(CID)得到特征的子離子。胍丁胺是一種潛在的神經遞質。胍丁胺的檢測限為0.6ng•ml-1(信噪比=3),在15-1000ng•ml-1濃度范圍內,線性相關系數為0.9997。此方法優點是能準確地定性定量,但對儀器要求較高,經濟性和普及性都不好,測定的胺種類較少。
2.2丹酰氯(Dansylchloride)柱前衍生高效液相色譜法測定生物胺
HPLC檢測香腸中的色胺,苯乙胺,腐胺,尸胺,組胺,5-羥基色胺,酪胺,亞精胺和精胺。用高氯酸處理、丹酰氯衍生后,用氨水去除尸胺附近的干擾峰。C18反相色譜柱梯度分離,流動相為乙腈:甲醇:水:乙酸=43:30:26:1。紫外檢測器(λ=254nm),流速為1.0mL•min-1,該方法對于單個胺的檢測限是1-5mg•kg-1。線性相關系數都要大于0.9999。丹酰氯衍生法是一種簡單,可靠,實用的方法,選用微波反應系統能大量縮短實驗時間,衍生產物穩定。