HPLC法測定不同廠家牡丹皮中丹皮酚的含量
作者：張詠梅，劉曉燕，張月嬋
作者單位：張家港市中醫醫院(江蘇 張家港 215600)
【摘要】 目的：建立測定不同廠家牡丹皮藥材中丹皮酚含量的高效液相色譜法。方法：以Hypersil C18柱(5μm，4.6mm×250mm)為色譜柱，流動相為甲醇-水(45:55)，流速為1.0mL/min ，檢測波長為274nm。結果：丹皮酚線性范圍為0.026416～0.079248μg，r2=0.9999;平均回收率為98.325% ，RSD 為1.22%。結論：采用HPLC 以丹皮酚含量為指標比較牡丹皮飲片質量，該法簡便易行。
【關鍵詞】 牡丹皮;丹皮酚;HPLC
Determination of Paeonol in Cortex Moutan by HPLC
Zhang Yongmei,et al
Zhangjiagang City Hospital of TCM(Zhangjiagang 215600)
Abstract：Objective：To establish HPLC method for the determination of paeonol in Cortex Moutan from different factories.Methods：The Hypersil C18(4.6mm×250mm，5μm)was used with methanol：water(45：55)as mobile phase.The flow rate was 1.0 mL·min-1.The detecting wavelength was 274 nm .Results：The linear of paeonol was in the range of 0.026416～ 0.079248μg，r2=0.9999.The average recovery was 98.325% and RSD was 1.22%.Conclusion：The method was simple，reliable， accurate and suitable for the quality control of paeonol in Cortex Moutan.
Key words：Cortex Moutan;paeonol;HPLC
牡丹皮為《中國藥典》收載的常用中藥，系毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的干燥根皮，具清熱涼血、活血祛瘀之功效[1]，研究發現牡丹皮還具有抗炎、鎮靜、降壓、抗血栓、抗動脈粥樣硬化和抗心率失常等作用。牡丹皮主要含有丹皮酚、芍藥苷、羥基芍藥苷、苯甲酰基芍藥苷以及苯甲酰羥基芍藥苷等成分[2,3]，丹皮酚(paeonol)是牡丹皮中的主要有效成分之一, 大量藥理實驗證明,丹皮酚具有抗炎、降壓以及對中樞神經系統作用[4,5], 另有研究指出丹皮酚還具有抗腫瘤的作用[6]。 因此可以采用丹皮酚的含量高低作為衡量牡丹皮品質優劣的一種重要指標。目前常采用高效液相色譜法,以丹皮酚作為定量指標控制牡丹皮的質量[7-8]。
本實驗參考現行版中國藥典一部“牡丹皮”項下丹皮酚的含量測定方法，用HPLC對市售五個廠家的牡丹皮進行品質評價，便于藥品采購人員以及臨床醫生對不同產地丹皮的正確認識與使用。
1 儀器及試藥
1.1 儀器
島津LC-10AT高效液相色譜儀，SPD-10A檢測器;HW-2000色譜工作站(上海千普軟件有限公司);色譜柱：Hypersil C18 ( 中科院大連化學物理研制所，250×4.6nm,5μm);TG328A電光分析天平;2102T超聲波清洗器(上海安譜科學儀器有限公司);DHG-9053A型電熱恒溫鼓風干燥箱。
1.2 試藥
丹皮酚(中國藥品生物制品檢定所，批號：0708-9704，供含量測定用);甲醇為高效液相色譜純(美國沃凱公司生產，國藥集團化學試劑有限公司分裝)，水為重蒸餾水，其余試劑均為分析純。
牡丹皮各樣品由本地五家藥材公司提供，以批號代替該廠家，分別編號為：S1- 081201，S2- 081110，S3- 081128，S4- 080909，S5- 081111。均經鑒定為毛茛科植物牡丹Paeonia suffruticosa Andr.的根皮。留樣憑證存放于張家港市中醫醫院制劑室。
2 方法與結果
2.1 色譜條件
色譜柱：反相C18柱: Hypersil ODS C18柱(5μm，4.6mm×250mm);流動相:甲醇-水(45：55);流速:1.0mL/min。測定波長:274nm。
2.2 樣品的制備方法
2.2.1 對照品溶液的制備
精密稱取丹皮酚對照品適量，加甲醇溶解，制得6.604μg/ml的貯備液。
2.2.2 供試品溶液的制備[1]
將已編號的牡丹皮藥材干燥并粉碎，過40目篩，精密稱定粉末0.5g，置具塞三角瓶中，精密量取甲醇50ml,密塞，搖勻，稱定重量，超聲處理30min，取出放冷，稱重，用甲醇補足減失的重量，搖勻，過濾，精密量取續濾液1ml，置10ml量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，取適量經微孔濾膜(0. 45μm )過濾，即得。
2.3 線性關系的考察
取丹皮酚對照品溶液，分別精密吸取4、6、8、10、12μl，注入高效液相色譜儀進樣器，測定，以峰面積為縱座標(Y)，對照品進樣量(μl)為橫座標(X)，繪制標準曲線，得回歸方程：Y = 30282X-3583.8，R2 = 0.9999。丹皮酚進樣量在0.026416～0.079248μg范圍內，與峰面積之間呈良好線性關系。結果見表1。表1 丹皮酚的線性關系考察
2.4 精密度試驗
在上述色譜條件下,吸取對照品溶液10μl，連續測定5次，結果見表2。結果表明該法精密度良好。表2 丹皮酚的精密度試驗結果
2.5 穩定性試驗
取批號為20081110的牡丹皮粉末0.5g，按供試液制備法制備。樣品于0小時、2小時、4小時、6小時及8小時，分別進樣5μl分析。RSD=0.99%，說明供試液中丹皮酚在8小時內穩定，結果見表3。表3 穩定性考察結果
2.6 重復性試驗
按擬定的含量測定方法，取批號為20081110的牡丹皮粉末，分別精密稱取5份，每份約0.5g，按供試液制備法制備，即得5份供試液，分別吸取5μl，依法測定，計算含量，結果見表4。結果表明，該法重復性良好。表4 藥材中丹皮酚的重復性試驗結果
2.7 加樣回收率試驗
取重復性試驗中含量已測定的牡丹皮藥材粉末(批號20081110)進行加樣回收試驗。稱取牡丹皮粉末約0.25g共六份，分別加入丹皮酚對照品(樣品含量的80%、100%和120%)，按供試液制備法制備，即得6份供試液，依法測定，計算含量，測定結果見表5。結果表明，該法回收率良好。表5 丹皮酚的加樣回收率試驗結果
按擬定的含量測定方法，取已編號的五批樣品,分別精密稱取約0.5g，按供試液制備法制備，精密吸取5μl注入高效液相色譜儀。測定結果見圖1、表6。表6 牡丹皮中丹皮酚含量測定結果
3 討論
3.1 實驗結果可見，除081111批號生產廠家未符合2005版中國藥典牡丹皮項下以丹皮酚(C9H10O3)計不得少于1.2%的規定外，其余樣品都達到含量限定要求。其中081201批號牡丹皮丹皮酚含量最高。分析原因牡丹皮有效成分含量可能因產地、采收季節、儲藏、炮制方法、提取工藝等條件不同,都會有較大差異。
3.2 不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量有很大差異，提示飲片采購員以及臨床中醫師對不同產地牡丹皮有正確的認識，同時為飲片采購員提供進貨依據,并為臨床中醫師提供處方用量參考。
3.3 牡丹皮的商品規格按產地加工不同主要有原丹皮和刮丹皮兩種。范明等[9]通過實驗，發現一般原丹皮的丹皮酚含量普遍高于刮丹皮。提示，牡丹皮表皮也含有一定量的丹皮酚。建議可考慮簡化藥材采收加工時趁鮮刮去牡丹皮表層黑皮這道工序。
【參考文獻】
[1] 中華人民共和國藥典一部[S].北京：化學工業出版社，2005 版：119.
[2] 肖培根.新編中藥志[M],第三卷:北京:化學工業出版社.601～606.
[3] 李方軍.牡丹皮化學成分及藥理作用研究進展[J].安徽醫藥,2004,8(1):9～10.
[4] 李群愛.牡丹皮的藥理研究[J].中草藥,1988,19(6):36.
[5] 王愛寶,唐希燦.丹皮酚磺酸鈉的鎮痛,解熱,消炎和毒性研究[J].中草藥,1983,14(10):26.
[6] 孫慧群，王曉琦，于麗繁，等.丹皮酚對MDR逆作作用研究[J].解剖科學進展，2000，6(1)：59-61.
[7] 徐樹蕓,王海寧.反向高效液相色譜法測定牡丹皮藥材中丹皮酚的含量[J].貴州醫藥,2004,28(11):1021-1022.
[8] 姜瀟,張廣宏,劉學起.HPLC法測定牡丹皮中丹皮酚的含量[J].齊魯藥事，2004,23(6):31.
[9] 范明,邱燕,范榕.不同產地牡丹皮中丹皮酚的含量測定[J].福建中醫藥，1999,30(40):41.