方法一、肌苷酸脫磷酸法
肌苷酸二鈉的制備 棒狀桿菌269發酵，發酵液去菌體，吸附，洗脫，濃縮，加乙醇，pH7-7.5條件下結晶可得肌苷酸二鈉。
棒狀桿菌269[發酵]→發酵液[去菌體，吸附，洗脫，濃縮]→濃縮液[乙醇]→[pH7-7.5]肌苷酸二鈉
肌苷粗品的制備 在乙酸緩沖液中，調pH5.4-5.6，加壓137-147kPa，脫磷酸5h，可得肌苷粗品。
肌苷酸二鈉[乙酸，加壓]→肌苷
精制 蒸餾水溶解，pH=6，重結晶，可得精品。
方法二、一步發酵法
菌株選育 變異芽孢桿菌7171-9-1移接到斜面培養基上，30-32℃培養48h。斜面培養基成分為葡萄糖1%，蛋白胨0.4%，酵母浸膏0.7%，牛肉浸膏1.4%，瓊脂2%，在pH7、120℃滅菌20min。
變異芽孢桿菌7171-9-1[斜面培養]→[30-32℃, 48h]菌種斜面
種子培養
一級種子：培養基成分為葡萄糖2%，蛋白胨1%，酵母浸膏1%，玉米漿0.5%，尿素0.5%，氯化鈉0.25%。滅菌前pH 7，用1L三角瓶裝150ml培養基，115℃滅菌15min。每個三角瓶中接入白金耳環菌苔，在往復式搖床上，32℃±1℃培養18h。
二級種子：培養基同一級種子，放大50L發酵罐，定容體積25L，接種量 3%，32℃±1℃培養12-15h，攪拌速度320r/min，通風量1：0.25V/(V·min)，生長菌指標 A(650nm)=0.78，pH=6.4-6.6。
菌種斜面[搖床振蕩]→[pH7, 32℃±1℃, 18h]一級種子培養液[50L發酵罐]→[pH6.4-6.6, 32℃±1℃, 12-15h]二級種子培養液
發酵 50L不銹鋼標準發酵罐，定容體積35L。培養基成分為淀粉水解糖10%，干酵母水解液1.5%，豆餅水解液0.5%，尿素0.4%，硫酸鎂0.1%，氯化鉀0.2%，磷酸氫二鈉0.5%，硫酸銨1.5%，有機硅油0.05%。pH=7，接種量0.9%，32℃±1℃培養93h，攪拌速度320r/min，通風量1：0.5V/(V·min)。500L發酵罐，定容體積350L。培養基成分為淀粉水解糖10%，干酵母水解液1.5%，豆餅水解液0.5%，硫酸銨1.5%，硫酸鎂0.1%，氯化鉀0.2%，磷酸氫二鈉0.5%，碳酸鈣1%，有機硅油小于0.3%。pH=7，接種量7%，32℃±1℃培養75h，攪拌速度230r/min，通風量1：0.25V/(V·min)。
20000L 發酵罐，培養基同上，接種量2.5%, 35℃±5℃培養83h。
二級種子培養液[50L發酵罐]→[pH7, 32℃±1℃, 93h]發酵液[500L發酵罐]→[pH7, 32℃±1℃, 75h]發酵液[20000L發酵罐]→[pH7, 35℃±1℃, 83h]發酵液
提取、吸附、洗脫 將發酵液30-40L 調pH=2.5-3，連同菌體通過2個串聯的3.5kg 732H樹脂柱吸附。用相當于樹脂總體積3倍的pH 3水洗1次，把兩柱分開，用pH 3水把肌苷洗脫下來，再經769活性炭柱吸附肌苷，先用2-3倍體積的水洗滌，再用70-80℃水洗，70-80℃，1mol/L氫氧化鈉溶液浸泡30min，最后用0.01mol/L氫氧化鈉溶液洗脫肌苷，收集洗脫液，真空濃縮，pH11或6放置，過濾，得粗品。
發酵液[732樹脂柱]→[pH2.5-3]吸附物[水]→[pH2.5-3]洗脫液[769活性炭柱]→吸附物[蒸餾水，氫氧化鈉]→[70-80℃][氫氧化鈉]→[70-80℃]洗脫液[濃縮結晶]→[pH11或6]肌苷粗品
精制 將粗品配成5%-10%的溶液，加熱溶解，抽濾，冷卻，過濾，少量水洗，烘干，即得肌苷精制品。
肌苷粗品[蒸餾水]→[重結晶]肌苷成品。