異硫氰酸胍應用之提取DNA和RNA

摘要：本文介紹了異硫氰酸胍的一種用途，即異硫氰酸胍法同時提取血清、雙拭子中動物DNA病毒和RNA病毒核酸。該方法綜合了經典的Trizol提取法和以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法兩種方法，彌補了兩種方法的缺陷。
關鍵詞：異硫氰酸胍法，593-84-0，提取DNA和RNA，Trizol提取法，硅膠模柱式提取法
前言
異硫氰酸胍，CAS號：593-84-0，分子式：C2H6N4S，分子量：118.161，白色結晶粉末，熔點115-120℃，用于變性裂解細胞；提取RNA和DNA，無RNA酶和DNA酶活性,強蛋白變性劑，是蘇州亞科化學的優勢產品。文章介紹了專利型異硫氰酸胍法提取同時提取DNA病毒和RNA病毒核酸。
異硫氰酸胍法提取同時提取DNA病毒和RNA病毒核酸
隨著分子生物學的快速發展，基因診斷成為檢測動物疫病最準確而有效地手段，進行基因診斷的過程中，病毒核酸的提取是進行檢測的前提條件，核酸提取的質量也影響檢測的準確性。
當前，動物病毒核酸提取方法主要有經典Trizol提取法和以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法兩種方法。經典Trizol提取法過程繁瑣、周期長、提取效率低、技術要求高，以Trizol作為裂解液的硅膠模柱式提取法成本較高、提取RNA的質量不高、且只能提取RNA病毒。
一種同時提取血清、雙拭子中動物DNA病毒和RNA病毒核酸的方法，包括步驟：對待提取物使用異硫氰酸胍裂解液裂解；硅膠膜吸附RNA；洗液Ⅰ除去雜蛋白；洗液Ⅱ洗去雜質；DEPC水洗脫核 酸；上述異硫氰酸胍裂解液包括3-7M異硫氰酸胍、0.6%-1.0%TriTon-100、30-50mM Tris-Cl、5-15mM DTT、60-90μg/mL蛋白酶K、10-30mM EDTA，PH在4.3-4.6。
上述洗液Ⅰ包括5-6M鹽酸胍，53-59%無水乙醇，K70-90μg/mL蛋白酶，PH在6.4-6.6；上述洗液Ⅱ包括70-80%乙醇。
進一步地，上述異硫氰酸胍裂解液包括5M異硫氰酸胍、0.8%TriTon-100、40mM Tris-Cl、10mM DTT、80μg/mL蛋白酶K、20mM EDTA，pH在4.5。進一步地，上述洗液Ⅰ包括5.5M鹽酸胍，56%無水乙醇，80μg/mL蛋白酶K，PH在6.5。進一步地，上述洗液Ⅱ包括75%乙醇。
上述操作步驟包括：
（1）取一干凈離心管，100μL樣品加入200μL的異硫氰酸胍裂解液中，振蕩混勻，放置5分鐘。
（2）加入與異硫氰酸胍裂解液等體積的無水乙醇，即200μL，顛倒反復混勻15秒。
（3）將過濾柱套在2mL收集管上，全部混合液移到過濾柱上，12,000rpm離心1分鐘。
（4）棄收集管內的液體，往過濾柱加入600μL的洗液1，12000rpm離心1分鐘。
（5）棄收集管內的液體，往過濾柱加入600μL的洗液2，12000rpm離心1分鐘，再重復一次。
（7）棄收集管內的液體，過濾柱套在收集管上，12000rpm離心1分鐘；
（8）換新的1.5mL離心管套上過濾柱，加20μLDEPC到過濾柱膜上，室溫放置1分鐘，12,000rpm離心1分鐘，收集濾液，保存。
結束語
該發明的有益效果：同時提取動物血清樣本、雙拭子樣本中的RNA病毒和DNA病毒核酸，具有方法簡便、快速、成本低的特點。該方法為建立動物RNA病毒和DNA病毒多重PCR方法奠定核酸提取基礎。