方法一、重組TNFα的工藝過程
細菌發酵 將工程菌接種于LB培養基，37℃震蕩培養至A600nm=1，轉至M9培養基，于42℃誘導4h。離心，收集菌體。用pH為8的磷酸鹽緩沖液(PB，10mmol/L)懸浮菌體，并用超聲破碎菌體，離心收集上清液，對PB透析，得TNFα粗品。
工程菌[培養、發酵]→[37℃、42℃]發酵菌體[10mmol/L PB]→[pH8]TNFα粗品
DEAE-Sepharose FF 離子交換柱層析 離子交換柱用PB平衡，加TNFα粗品，用PB洗柱，再加75 mmol/L NaCl洗脫，收集各峰，測TNFα活性。
TNFα粗品[DEAE-Sepharose FF離子柱]→[75 mmol/L NaCl]TNFα活性組分I
Q-Sepharose FF離子交換柱層析 離子交換柱用pH 8、20 mmol/LTris-HCl緩沖液平衡，然后加TNFα活性組分I，用80 mmol/L NaCl洗脫，收集各峰，測TNFα活性，得TNFα活性組分II。
TNFα活性組分I[Q-Sepharose FF離子柱]→[80 mmol/L NaCl]TNFα活性組分II
CM-Sepharose FF離子交換柱層析 離子交換柱用pH為6的10mmol/L PB平衡，加TNFα活性組分II，再依次用該PB液、PB液加200mmol/L NaCl及PB液加600 mmol/L NaCl分步洗脫，收集各洗脫液，測TNFα活性，即得TNFα純品(在4℃時，通過三次常壓離子交換，電泳表明：PB液加600 mmol/L NaCl的洗脫峰為TNFα單一條帶，可得TNFα純品)。
TNFα活性組分II[CM-Sepharose FF離子柱]→[PB、200及600mmol/L NaCl]TNFα純品

方法二、對合成的TNFα突變改造
突變改造 用多位點突變引物和PCR方法對合成的TNFα基因突變改造，使其第二位精氨酸密碼子CGT變為賴氨酸密碼子AAA，即得突變基因TNF-K2。
TNFα基因[多位點突變引物、PCR方法]→TNF-K2
轉化、重組 將TNF-K2插入載體pSB-92的PL啟動子下游，轉化E．coliJM103，經酶切鑒定篩選轉化子，得重組質粒pSB-TNF-K2。TNF-K2[pSB-92]→pSB-TNF-K2
培養、誘導 將pSB-TNF-K2于30℃培養至對數生長期，于42℃誘導4h，即得突變體[Lys2]TNFα，其分子量為17kD，比活性為6.8×107U/mg 蛋白，是一種可溶性蛋白質。
pSB-TNF-K2[30℃, 42℃, 4h]→[Lys2]TNFα.