檢測原理
1、羅丹明B具有脂溶性，被用作調味品（主要是辣椒粉和辣椒油）染色劑。使用了被污染的調味品制作食品時會造成殘留。調味品使用羅丹明B染色時含量較高，甚至直接摻入，可進行現場檢測。食品中因其含量較低，需送實驗室檢測。

2、現場檢測中使用非極性有機溶劑（例正己烷、正己烷+丙酮等）將其溶解并提取出，提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B，用非極性有機溶劑（例正己烷）淋洗小柱，洗脫樣品油脂和食品內源性干擾物，用肉眼可觀測到在小柱上出現鮮亮的粉紅色條帶，判定為可疑樣品，該樣品需送實驗室作進一步確證檢驗。

3、實驗室檢測法仍然采用非極性有機溶劑（例正己烷、正己烷+丙酮等）將羅丹明B 從食品中溶解并提取出，提取液流過中性氧化鋁固相萃取小柱吸附羅丹明B，用非極性有機溶劑（例正己烷）洗脫樣品油脂和食品內源性干擾物，再用極性有機溶劑（例甲醇）將羅丹明B從小柱上洗脫并收集，用反相高效液相色譜儀-紫外/可見光檢測器進行定性定量檢測。

檢測試劑
1、試劑和材料：層析用中性氧化鋁（100目），用前于105℃烘2小時，取下置干燥器中冷至室溫，裝入玻璃瓶中密閉放置。 
2、正己烷（分析純）、 丙酮（分析純）、 甲醇（色譜純）； 
3、 20%丙酮的正己烷液：取100ml丙酮加400ml正己烷混合，作為羅丹明B的提取液和凈化液。 氧化鋁固相萃取小柱：取5 ml塑料注射器管，下端口塞入小塊脫脂棉，裝入處理好的氧化鋁約3cm高，放置備用。 
4、 羅丹明B標準溶液：稱取羅丹明B （分析純試劑 沈陽試劑三廠）5.0mg，用20%丙酮的正己烷液（3.3）溶解并定容至50ml，配成含量為100ug/ml的標準儲備液。取此液0、0.25、0.5、1.0、2.0、4.0ml，用20%丙酮的正己烷液（3.3）稀釋并定容至50ml，配成濃度為 0.0、0.5、1.0、2.0、4.0、8.0ug/ml標準系列溶液。

快速檢測
1、 辣椒粉  取辣椒粉一小勺（約5g）放入小燒杯中，加入約40ml含20%丙酮的正己烷（3.3），搖動或攪拌2分鐘，靜置。取5 ml塑料注射器套管，下端口塞入小塊脫脂棉，將事先處理好的氧化鋁（3.1項）倒入注射器管中約3cm高，做成氧化鋁固相萃取小柱，待樣品杯上方澄清后，慢慢倒入小柱中，下端接一廢液杯，視顏色深淺倒入2-5ml，注意不要倒入太多，保證小柱的中下部仍為白色， 此時，含羅丹明B的樣品在柱上部會出現鮮亮的粉紅色的熒光條帶，條帶邊緣清晰，粉紅色隨含量的增加而加深和加寬，不含羅丹明B的樣品提取液不會出現粉紅色條帶，只會出現黃紅色的界面不清晰的寬帶，然后用含20%丙酮的正己烷（3.3）20ml慢慢倒入小柱，粉紅色的條帶不下移，但更清晰，其余的黃紅色帶下移，可大部分被洗脫出，即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。 

2、辣椒油  取辣椒油一小勺（約2g）放入小燒杯中，加入約10ml正己烷（3.2），混勻。按4.1項中“取5 ml塑料注射器套管，……即可判斷為含羅丹明B的可疑樣品。”操作。 

3、 判定  初步判斷為含羅丹明B的可疑樣品需送實驗室中進行液相色譜確證檢驗。

1、實驗室檢測方法，儀器是：高效液相色譜儀 （雙泵、紫外/可見光檢測器），色譜柱   C18  4.6mm X 15cm（5μm）

實驗檢測  

2、提取和純化， 辣椒粉：取辣椒粉1g，加入20ml含20%丙酮的正己烷（3.3），震搖10分鐘，靜置或過濾使分離出上層清液，殘渣加入10ml含20%丙酮的正己烷（3.3）重復提取一次，合并2次提取液，混勻，用滴管將上清液加入氧化鋁小柱（3.4）中[小柱預先用5ml提取液（3.3） 潤濕]，視顏色深淺決定上柱量，保證上完樣的小柱中下部仍為白色，含羅丹明B的樣品提取液在柱上部會出現鮮亮的粉紅色的熒光條帶，且粉紅條帶隨含量的增加而加深和加寬，不含羅丹明B的樣品提取液不會出現粉紅色條帶，只會出現黃紅色的不清晰的寬帶，用含20%丙酮的正己烷（3.3）洗小柱，粉紅色的條帶不下移，但更清晰，其余的黃紅色帶下移可大部分被洗脫出，可判斷為含羅丹明B的可疑樣品，待洗柱的流出液無色時，滴入5-10ml甲醇，將羅丹明B色帶洗下并收集，用甲醇定容后，注入高效液相色譜儀進行確認。  

3、辣椒油：稱取辣椒油1g，加入10ml含20%丙酮的正己烷（3.3），混合均勻后滴入氧化鋁小柱（3.4）中，按照5.2.1項中“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱……注入高效液相色譜儀進行確認”進行操作。 

4、其它食品：對于使用了紅辣椒油（粉）調味的食品（如紅油豆制品、紅油魚干等）稱取10-20g，用20%丙酮的正己烷（3.3）洗下紅油（粉），或將樣品與洗脫液攪成勻漿將羅丹明B溶解提取出，將樣品液靜置或離心，分出有機相，根據水分的多少加入適量無水硫酸鈉脫水，按照5.2.1項中“用滴管將上清液加入氧化鋁小柱，注入高效液相色譜儀進行確認”進行操作。含量少的樣品因粉紅色條帶太窄和顏色較淡肉眼看不清楚，仍可采用上述辦法，進一步用20%丙酮的正己烷（3.3）洗滌小柱至流出液無色時，滴入5-10ml甲醇，將羅丹明B色帶洗下并收集，經濃縮后，注入高效液相色譜儀進行確證檢驗。 

5、液相色譜條件 
5.1  色譜柱：C18 4.6mm X 15cm（5μm）  進樣 5ul 
5.2  流動相：75%甲醇水溶液  1ml/min 
5.3  檢測器: 紫外/可見光（UV/VIS）檢測器；波長：550nm 
5.4  定性定量：羅丹明B標準溶液保留時間定性，外標法定量。 

5.4  結果計算 

    Y = C×V/M 

Y——樣品中羅丹明B的含量（mg/kg） 
C——從標準曲線上查得的羅丹明B的濃度（ug/ml） 
V——測試樣品總定容體積（ml） 
M——樣品的稱樣量（g） 

5.5  注意事項：①使用C18柱的性能有差異，流動相濃度應略作調整。②在本法所給分離條件下，樣品基質在羅丹明B附近無干擾峰，其他許多紅色偶氮染料均可在羅丹明B之后出峰，注意調整這些干擾峰與羅丹明B分離度，干擾的成分為：蘇丹橙G、對位紅、蘇丹紅7B、蘇丹紅Ⅰ、蘇丹紅Ⅱ、蘇丹紅Ⅲ、蘇丹紅Ⅳ。

相關標準:　
GB/T 6609.21-2004  氧化鋁化學分析方法和物理性能測定方法丁基羅丹明B分光光度法測定三氧化二鎵含量 Chemical analysis methods and determination of physical performance of alumina--Determination of gallium trioxide content--Butyrhodamine B spectrophotometric method
GB/T 20127.5-2006  鋼鐵及合金痕量元素的測定第5部分：萃取分離-羅丹明B光度法測定鎵含量 Steel and alloy - Determination of trace element contents Part 5: Determination of gallium content by extraction separation-rhodamine B photometric method
GB/T 7731.8-2008  鎢鐵 銻含量的測定 羅丹明B光度法和電感耦合等離子體原子發射光譜法 Ferrotungsten - Determination of antimony content - The tetraethylrhodamine photometrie method and inductively coupled plasma-atomic emission spectrometry
YS/T 244.4-2008  高純鋁化學分析方法 第4部分 丁基羅丹明B光度法測定鎵含量 Chemical analysis methods of high purity aluminum Part 4:Determination of gallium content by butylrhodamine B photometric method
YS/T 575.15-2007  鋁土礦石化學分析方法 第15部分 三氧化二鎵含量的測定 羅丹明B萃取光度法 Methods for chemical analysis of bauxite Part 15:Determination of gallium oxide content Rhodamine B-extraction photometric method
GB/T 20975.20-2008  鋁及鋁合金化學分析方法 第20部分：鎵含量的測定 丁基羅丹明B分光光度法 Methods for chemical analysis of aluminium and aluminium alloys - Part 20：Determination of gallium content Butyrhodamine B spectrophotometric method
YS/T 981.5-2014  高純銦化學分析方法 鉈量的測定 羅丹明B吸光光度法 Methods for chemical analysis of high pure Indium--Determination of thallium content --RhodamineB spectrophotometric method
GB/T 30927-2014  化妝品中羅丹明B等4種禁用著色劑的測定 高效液相色譜法

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85 羅丹明6G用作測定來硝酸根的新選擇性試劑  蔡亞岐;胡之德  化學試劑  1989  (2),73-74, 70 
86 汞-硫氰酸鈉-丁基羅丹明B吸光光度法的研究及應用  江淑英;揭念琴  理化檢驗(化學分冊)  1989  (5),279-280,282 
87 丁基羅丹明B萃取分光光度法測定甲基汞  龔國權;杜康平;王懷公  蘭州大學學報  1989  (2),64-67 
88 在AEO-9存在下, 磷釩鉬藍-羅丹明6G離子締合物高靈敏顯色反應的研究  李生泉;李士和;范月仙;劉長松  山西大學學報(自然科學版)  1989  (3),293-298 
89 PVA存在下銠-氯化亞錫-羅丹明B顯色體系的研究: 分光光度法測定痕量銠  劉鶴仙;馮克聰;閻彩香;曲鵬金  山西大學學報(自然科學版)  1989  (3),299-303 
90 砷鉬雜多酸─“羅丹明B"-阿拉伯樹膠顯色體系的研究: 分光光度法測定鋼鐵和錫基合金中的痕量砷  劉長松;楊莉華;張燕;袁宏  山西大學學報(自然科學版)  1989  (4),444-449
91 超高靈敏顯色反應及其應用的研究III銻(III)-乙基羅丹明B-碘化物體系  程剛;許生杰  冶金分析  1989  (2),5-8 
92 羅丹明6G熒光淬火法測定鋼中鉬  王筱敏;姜敏華;柏竹平;嚴風霞  冶金分析  1989  (5),27-29 
93 堿性染料雜多酸多元配合物顯色反應的研究V.乙基羅丹明B-磷鉬雜多酸-聚乙烯醇體系  賀曉唯;許生杰  應用化學  1989  (5),39-43 
94 堿性染料羅丹明B的通過二種不混溶溶劑的液體界面的離子轉移  SUN ZHISHENG;汪爾康  CHINESE JOURNAL OF CHEMISTRY  1990  (1),21-28 
95 一種新的測定痕量鐵的分光光度法利用Fe(Ⅲ)對H2O2氧化還原型羅丹明B的催化效應測定鐵  戴國忠;蔣治良;李昌雄  分析化學  1990  (1),39-41 ;圖2表1參2. 
96 以羅丹明B為指示劑催化動力學法測定痕量銅的研究  張志琪;馬祥林  分析化學  1990  (6),520-524 ;圖4表1參4 
97 堿性染料雜多酸多元配合物顯色反應的研究 VI. 丁基羅丹明B-砷鉬雜多酸-聚乙烯醇-124體系  張紅珍;許生杰  分析化學  1990  (8),710-714 ;圖6表3參6 
98 銥(III)-氯化亞錫-羅丹明B高靈敏顯色反應的研究 ─浮選光度法測定銥  楊國祥;趙敏政;李振亞  分析化學  1990  (9),836-839 ;圖4表1參6 
99 超高靈敏顯色反應及其應用的研究Ⅴ.鎢(Ⅴ)-SCN-乙基羅丹明B-PVA-124體系  張紅琴;許生杰  分析化學  1990  (11),987-991 ;圖4,表2,參11 
100 羅丹明B-硫氰酸鉀分光光度法測定微量銅  楊季良  分析試驗室  1990  (1),69