高效液相色譜法測定聯苯甲酸異構體的含量
劉博謙1 , 　楊秋青2 , 　侯士聰1
(1 .中國農業大學理學院, 北京　100193 ;2 .河北師范大學實驗中心, 河北石家莊　050016)

摘要:建立了3 位和4 位聯苯甲酸同分異構體混合物的高效液相色譜法(HPLC)含量測定.色譜柱為SymmetryC18 , 檢測波長254 nm, 流動相為甲醇-磷酸二氫鉀(1.2 mol/ L), 流速1 mL/min.3-聯苯甲酸的線性范圍是48～ 720 mg/ L, 4-聯苯甲酸線性范圍是21～ 685 mg/ L;最低檢出質量濃度均為0.01 mg/ L , 相關系數分別為0.999 2和0.999 8 ;平均回收率分別是99 .4 %和98 .8 %(n =6), RSD 分別為0.87 %和0 .93 %.

關鍵詞:聯苯甲酸異構體;HPLC ;含量測定
中圖分類號:O 657 .7 +2 　　　文獻標識碼:A 　　　文章編號:1000-5854(2009)06-0770-03

3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸是同分異構體, 在采用甲苯氧化生成苯甲酸的合成工藝中, 同時生成3 位和4位聯苯甲酸異構體副產物;其母體結構聯苯是由2 個獨立苯環構成的多環芳香烴, 是一種重要的有機原料,由于其衍生物獨特的結構而顯示出特殊的作用, 近年來在醫藥、染料、液晶[ 1～ 3] 等領域的應用不斷深入, 顯示了良好的應用前景.我國目前對聯苯和聯苯衍生物的需求量不斷增大.

3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸還是合成糖尿病等藥物原料的中間體, 由于兩者分子量相同, 結構相近, 性質相似, 具有相近的紫外吸收, 故兩者的分離和含量測定較為困難.3 位和4 位聯苯甲酸同分異構體的高效液相色譜法(HPLC)測定未見報道.

1 　儀器與試劑
1 .1 　儀　器
Waters 1525 高效液相色譜儀(美國Waters 公司), 2487 雙通道紫外檢測器, 自動進樣系統.
1 .2 　試　劑
甲醇為色譜純(美國迪馬公司), 磷酸二氫鉀和磷酸均為分析純, 水為高純水.
1 .3 　高效液相色譜條件
色譜柱:Symmet ry C18 5 μm , 4 .6mm ×150 mm ;流動相:甲醇+磷酸二氫鉀緩沖溶液;流速1 mL/min ;進
樣量10 μL ;檢測波長254 nm .
2 　方法與結果
2 .1 　優化色譜條件
由于3 位和4 位聯苯甲酸同分異構體的結構相近, 性質相似, 它們的紫外吸收峰接近, 兩色譜峰的保留時間相差不大, 難以分離.本實驗著眼于色譜條件的優化, 篩選出流動相中甲醇和磷酸二氫鉀緩沖溶液的最佳配比, 確定測試溫度和溶液pH 值, 以達到兩峰基線分離的目的.pH 值分別選擇2 , 3 , 4 , 4 .5 時, pH 值的變化對本實驗影響顯示:pH 為2 , 3 時好于pH 為4 , 4 .5 ;故選擇pH 在2 ～ 3 .選擇溫度20 , 30 , 40 , 50 ℃變化不等, 均未發現分離效果的轉變, 故本實驗采用室溫測試.

經過流動相不同比例變化的多次實驗結果顯示, 隨著甲醇質量濃度由高到低的變化, 兩峰的分離度逐漸變大, 兩者的保留時間增大, 兩峰的分離度也隨之加大(見圖1a , b);當V (甲醇)∶V(水)(磷酸二氫鉀1 .2mol/L)=65∶35 時兩峰實現基線分離, 此時3-聯苯甲酸的保留時間為9 .70 min , 4-聯苯甲酸為10 .68 min。

2 .2 　檢出限和線性關系的考察
分別精密吸取3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸對照品溶液5 , 10 , 15 , 20 , 30 μL , 進樣, 依照上述優化色譜條件測試峰面積, 以峰面積Y 為縱坐標, 進樣量X (μg)為橫坐標進行線性回歸, 分別得兩者的回歸方程為
3-聯苯甲酸:Y =4 .64 ×10³X -6 .92 ×10³ ,
R =0 .9992 .
4-聯苯甲酸:Y =4 .23 ×10⁶X -4 .63 ×10⁴ ,
R =0 .9998 .

結果顯示:3-聯苯甲酸最低檢出限為0 .01 mg/L ,進樣量在48 ～ 720 μg 與峰面積呈良好線性關系;4-聯苯甲酸最低檢出限為0 .01 mg/L , 進樣量在21 ～ 685 μg線性良好.

2 .3 　精密度試驗
分別精密吸取3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸對照品溶液10 μL , 連續進樣6 次, 依照上述優化色譜條件測定峰面積.3-聯苯甲酸峰面積的RSD 為0 .39 %, 4-聯苯甲酸峰面積的RSD 為0 .54 %.

2 .4 　重復性試驗
精密稱取同一批號樣品5 份, 制成供測試樣品溶液, 在上述優化色譜條件下測定3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸混合試樣, 計算平均含量分別為0 .056 , 0 .042 g/L , RSD 分別為0 .59 %和0 .81 %.

2 .5 　穩定性試驗
取供測試樣品溶液20 μL , 分別于制備后0 , 2 , 5 , 10 , 15 h 注入液相色譜儀, 按照上述優化色譜條件測定,計算峰面積:3-聯苯甲酸RSD 為0 .37 %, 4-聯苯甲酸RSD 為0 .65 %.結果表明:供測試樣品溶液在15 h 內穩定性良好.

2 .6 　回收率試驗
稱取已知含量的混酸樣品3 份, 分別置于50 mL 容量瓶中, 向這3 份溶液中分別精密加入從低到高的3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸對照品, 按上述優化色譜條件測試兩者的峰面積, 計算回收率.結果顯示兩者在低、中、高3 種質量濃度下的平均回收率分別是:3-聯苯甲酸平均回收率為99 .4 %, RSD 0 .87 %;4-聯苯甲酸平均回收率為98 .8 %,RSD 0 .93 %.相關數據見表1 .

2 .7 　樣品的測定
按照本方法測試條件, 分別測定3 個不同批次樣品, 采用外標法計算混酸中3-聯苯甲酸和4-聯苯甲酸各自含量, 測定結果見表2(n 為平均取樣次數).
表1　2 個同分異構體的回收率測定結果

測定項目   本底值加標量/(g·L-1) 測定平均值/(g·L-1) 回收率/ %
  
                        0 .03             0.053(n =6)               97 .6
3-聯苯甲酸    0.024            0 .10 0.125(n =6)      101 .2
                        0 .20             0.221(n =6)               99 .5