測量不確定度是“表征合理地賦予被測量值的分散性，與測量結果相關聯的參數”，它是被測量客觀值在某一量值范圍內的一個評定，不確定度越小，測量結果的質量越高，使用價值越大。測量不確定度對實驗室問比對，測量結果臨界值的判斷，方法的確認以及檢測工作國際化等方面，都有重要的意義。本文根據《測量不確定度評定與表示》(JJ— F1059—1999)、《化學分析測量不確定度評定》 (JJF1135-2005)和《化學分析中不確定度的評估指南》(CNAS—GL06：2006)中有關規定對復方丹參含片中HPLC法測定原兒茶醛含量的測量不確定度進行了分析，以期找出影響不確定度的因素，對不確定度進行評估，為評價檢測報告提供科學依據。

1 儀器與試藥
    HP1100型系列高效液相色譜儀(美國)，包括G1322A在線脫氣，G1311A四元梯度泵、G1316A柱溫箱、G1315B二極管陣列檢測檢測器；AE-240電子分析天平(瑞士Mettler)；KQ-250B型超聲波清洗器 (昆山市超聲儀器有限公司)。

原兒茶醛對照品(批號110810-200506，購于中國藥品生物制品檢定所)；甲醇為色譜純(德國Mer— ck)；水為超純水(韓國Power Iplus超純水系統)，其余試劑均為分析純。

2 實驗方法
2.1 色譜條件
色譜柱：Hypersil ODS2(4.6 mill×200 mm，5 )；流動相：甲醇一1％冰醋酸=15：85；檢測波長： 280 Bin；流速：1.0 ml_／min。理論板數按原兒茶醛峰計算應不低于3000。

2.2 對照品溶液的制備
取原兒茶醛對照品約1O mg，精密稱定，置5O mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取5 mL，置50 mL量瓶中，加50％ 甲醇至刻度，搖勻，即得。

2.3 供試品溶液的制備
取本品20片，精密稱定，研細，取約0.4 g，精密稱定，置具塞錐形瓶，精密加入50％ 甲醇25 mL，稱定重量，超聲處理15 min，放冷，再稱定重量，用50％ 甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得。

2.4 測定法
分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各2O ，注入液相色譜儀，測定，利用外標法計算含量。

3 不確定度分析
化學分析中測量不確定度的評估過程主要有以下幾個步驟 4。：被測量量的技術規定；確定和分析不確定度來源；量化不確定度；合成標準不確定度的計算；擴展不確定度的給出；報告測量結果及不確定度。下面按這幾個步驟對本次實驗的測量不確定度進行評定和表示。

3.1 被測量量的技術規定
主要說明被測量量，建立數學模型。本法為外標法測定樣品中原兒茶醛成分的含量，其數學模型為(假設直線過原點)： P： 等 ×F×1000[mr／)~f] 式中，P為樣品中原兒茶醛的含量mr／片；As為樣品的峰面積響應值；Mr為對照品的取樣量g；為樣品溶液的體積mL；Ar為對照品的峰面積響應值；Ms為樣品的取樣量g；Vr為對照品溶液的Ar；W 為平均片重g；F為樣品非均勻性校正因子系數，值為l；1000：g換算為mg。

3.2 識別和分析不確定度來源
3.2.1 質量(M)
樣品和對照品的質量皆由增量法稱量給出。稱量不確定度主要來自3個方面：①稱量的重復性，可以通過多次重復測量讀數，計算得出，屬A類不確定度；②天平稱量最大允差引入的不確定度，屬B 類不確定度；③ 校準產生的不確定度，屬B類不確定度。

3.2.2 體積(V)
容量瓶與移液管中的溶液體積主要有3個不確定度來源：① 重復性，溶液充滿容量瓶(或移液管) 至刻度的變化，屬A類不確定度，可通過多次測定而得；②容量瓶允差，確定容量瓶內部體積時的不確定度，屬B類不確定度；③溫度系數引起的不確定度，屬B類不確定度，由于本文中測定溫度為20 ℃ ，與校準時溫度一致，故此項可忽略。

3.2.3 HPLC峰面積響應值
主要由峰面積重復性與儀器環境、進樣體積等其它因素的不確定度共同引起。峰面積重復性為A 類，可通過多次測定而得；儀器環境、進樣體積等的其它因素引起的不確定度為B類，由于對照品與供試品峰面積是在相同條件下測得，所以此項忽略。 3.2.4 樣品均勻性

即樣品測量的重復性，樣品的研磨和取樣會影響含量測定結果的差異，其產生的不確定度可以通過多份樣品的含量測量來求得，為A類不確定度。

3.2.5 對照品純度
對照品原兒茶醛購自中國藥品生物制品檢定所，由于尚無法得到不確定度參考值，故此項忽略。不同的因素及其影響見圖1。

3.3 不確定度分量的量化
3.3.1 Mr對照品的取樣量為0.01049 g，對照品稱量的不確定度U(Mr)=0.015 mg，相對不確定度U (Mr)=O.015 mr／10.49 mg=0.00143。

3.3.2 Ms樣品的取樣量為0.4000 g，樣品稱量的不確定度u(Ms)=0.15 mg，相對不確定度U (Ms) = 0.15 mg／400 mg=0.000375。

3.3.3 Vs樣品溶液體積的不確定度，25 mL單標線移液管的不確定度U(VS)=0.005 mL，相對不確定度U (VS)=0.005 mL／25 mL=0.0002。

3.3.4 Vr對照品溶液體積的不確定度，50 mL容量瓶定容兩次，50 mL容量瓶體積的不確定度U (Vr1)=0.005 mL，相對不確定度U (Vr)=0.005 mL×2／50 mL=0.0002；5 mL單標線移液管體積的不確定度u(Vr2)=0.0025 mL，相對不確定度U (vr2)=0.0025 mL／5 mL=0.0005。對照品溶液體積的相對合成不確定度為：U (Vr) =0.0002 +0.0005 =2.9×10一，u (Vr)=0.000539。 3.3.5 As通過測定峰面積多次，計算樣品峰面積平均值為4199，峰面積不確定度U(As)=8.356，其相對不確定度為u (As)=8.356／4199=0.00199。 3.3.6 Ar通過測定峰面積多次，計算對照品峰面積平均值為1745，峰面積不確定度U(Ar)=3.507，其相對不確定度為u (Ar)=3.507／1745= 0.00201。

3.3.7 w稱取2O片，得平均片重0.4034 g，平均片重的不確定度u(W)=0.00184 g，相對不確定度u (W)=0.00184 g／0.4034 g=0.00456。

3.3.8 F依照“2.3”項下方法平行配制三份樣品溶液，分別進行測定，計算樣品重復性不確定度u= 0.009 mg，相對不確定度U =0.009 mg／1.273 mg= 0.00707，F相關不確定度據此折換為u(F)=U (F) = 0.00707。

各數值和不確定度見下表。

3.5 擴展不確定度的給出
取置信概率為95％ ，包含因子k=2，將相對合成標準不確定度乘以包含因子得到相對擴展不確定度，u(P)=0.01l×2=0.022 mg。

3.6 報告測量結果及不確定度
復方丹參含片中原兒茶醛的含量為：P= (1.273-I-0.022)mg，其中“±”后的數是擴展不確定度U=ku(P)，由u(P)=0.011 mg和k=2確定k= 2是根據置信概率為95％ 由t分布確定的。

4 討論
4.1 考慮到樣品的不均勻性，在計算公式中加人了均勻性因子，其作用是將樣品不均勻性產生的不確定度帶人公式，而與計算結果無關，所以設其值為1。

4.2 對圖2的分析表明，樣品均勻性，片重差異和高效液相色譜儀的性能引人的不確定度較大，為不確定度的主要來源，其中樣品均勻性影響最大，因此在分析測定時應加以嚴格控制，充分研磨樣品并混合均勻。

4.3 本文提供了一種檢測結果測量不確定度計算的方法和思路，可以推廣用于液相色譜法測定成分的含量，分析引入的分量，找出影響較大的因素并在以后的實驗中加以注意和改進，以期得到高質量的測量結果。