咖啡酸，別名3,4-二羥基肉桂酸，英文名稱Caffeic acid，分子式C9H8O4，分子量180.15。它是從濃水溶液得黃色結晶，從稀水溶液得一水合物。微溶于冷水，易溶于熱水及冷乙醇。咖啡酸存在與多種植物中，具有抗菌抗病毒功效，效果顯著，因此有較多用途。

      咖啡酸可在化妝品中安全使用，有較廣泛的抑菌和抗病毒活性。能吸收紫外線。低濃度即具抑制皮膚型發用染料的助劑，有利于增強色澤的強度。
咖啡酸也是一種止血升白細胞藥，具有收縮凝固微血管、提高凝血因子功能、升高白細胞和血小板的作用。適用于外科手術時預防出血或止血，以及內科、婦產科等出血性疾病的止血。也用于各種原因引起的白細胞減少癥、血小板減少癥。

      咖啡酸及其衍生物在植物中分布非常廣泛,具有很多生物活性,化學結構相對簡單,代謝迅速,是一類具有良好應用前景的天然活性成分。然而目前對其的開發利用仍不夠充分，相信隨著研究的不斷深入,未來可以將咖啡酸及其衍生物的生源合成途徑體系與其構效關系相結合,目的性地開發功能性的咖啡酸衍生物,并運用到醫藥、食品等領域中。

咖啡酸在食管癌治療中的應用

【技術領域】
[1]本發明涉及咖啡酸的新用途，尤其是涉及一種咖啡酸在食管癌治療中的應用。

【背景技術】
[2]咖啡酸(Caffeic Acid)，又稱3，4一二羥基肉桂酸，是一種從中藥如丹參、野胡蘿卜、光葉水蘇、蕎麥、木半夏、咖啡菊科植物等中提取的天然產物，具有以下作用:
1、抗菌抗病毒:具有較廣泛的抑菌作用，但在體內能被蛋白質滅活。體外試驗表明，有抗病毒活性，對牛痘和腺病毒抑制作用較強，其次為脊髓灰質炎I型和副流感m型病毒。
2、抗蛇毒:咖啡酸3微克劑量時能完全抑制20微克響尾蛇毒磷酸二酯酶，用作抗蛇毒劑。
3、其他作用:口服或腹腔注射時，咖啡酸可提高大鼠的中樞興奮性；口服，可增加人胃中鹽酸的分泌量，并能使脈搏變慢;可增強子宮的張力，此作用可被罌粟堿所拮抗，而阿托品則不能影響；可增進大鼠膽汁分泌。有升高白血球和血小板、止血及滅活維生素BI等作用。能抑制鼠腦組織勻漿脂質過氧化物的生成。有縮短血凝及出血時間的作用。
[3]食管癌是我國常見的惡性腫瘤之一，死亡率在消化系統惡性腫瘤中列第二位，僅次于胃癌。化療是治療食管癌及術后患者的方法之一，但化療藥物對骨髓抑制較嚴重，容易引起白細胞減少等。
[4]國內在中醫文獻中曾有報道，咖啡酸有一定抗腫瘤治療及提高免疫力作用，但是，僅為個案報道。療效不明顯，治療機理不清楚，數據不完整。目前咖啡酸用于食管癌腫瘤細胞治療方面未見有文獻報道。

【發明內容】
[5]為解決上述問題，本發明的目的是提供一種咖啡酸在食管癌治療中的應用，具體地，是作為分子靶向藥物在食管癌治療中的應用。
[6]為實現上述發明目的，本發明采用如下技術方案:
一種咖啡酸在食管癌治療中的應用，作為食管癌腫瘤細胞內組蛋白去甲基化酶GASCl基因的抑制劑。
[7]上述的咖啡酸在食管癌治療中作為分子靶向藥物，能夠抑制食管癌腫瘤細胞的生長和/或抑制腫瘤的復發、轉移，減小癌細胞繁殖。
[8]上述的咖啡酸在食管癌治療中作為表觀遺傳學藥物，實現多個靶點治療。
[9]上述的食管癌腫瘤包括各種實體原發性腫瘤、轉移性腫瘤或復發性腫瘤。
[10]上述的咖啡酸可以制成任何可口服藥用的劑型，這些劑型包括:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、丹劑、混懸劑。
[11 ]上述的咖啡酸是現有技術，可以從市場上買到，也可以根據現有技術制備，符合藥用標準。
[12]分子靶向治療，是在細胞分子水平上，針對已經明確的致癌位點(該位點可以是一個基因片段)，來設計相應的治療藥物，藥物進入體內會特異地選擇致癌位點結合發生作用，使腫瘤細胞特異性死亡，而不會波及腫瘤周圍的正常組織細胞。
[13]咖啡酸作為組蛋白去甲基化酶GASCl (Gene amplified in squamous cellcarcinoma I)的抑制劑，通過特異性阻斷GASCl分子革E點可抑制干性核心轉錄因子S0X2核心啟動子上組蛋白H3K9me3去甲基化，通過維持組蛋白H3K9me3的高甲基化狀態抑制干性核心轉錄因子S0X2的轉錄活性及表達，影響其表觀遺傳修飾功效，從而在食管癌細胞增殖及干性維持中發揮抑制作用。
[14]由于采用如上所述的技術方案，本發明具有如下優越性:
本發明利用咖啡酸作為分子靶向藥物抑制食管癌腫瘤細胞的生長和/或抑制腫瘤的復發、轉移，減小癌細胞繁殖，為食道癌提供了有效的治療手段;表觀遺傳抗癌藥物與傳統化療藥物之間的聯合應用，可實現多靶點治療及最大限度發揮減毒增效作用。

【具體實施方式】
[16]參照以下實施例可以對本發明作進一步詳細說明；但是，以下實施例僅僅是例證，本發明并不局限于這些實施例。
[17]實施例1
1、人食管癌腫瘤細胞培養
(1)、細胞傳代前提前做好培養瓶包被(培養瓶瓶底用鼠尾膠原包被，效果較好)；
(2)、每日換液；
(3)、細胞匯合度達80?90%時傳代，傳代比例為1:8或1:10；
(4)、在細胞生長至鋪滿培養瓶80?％時，光學顯微鏡下觀察細胞的生長情況并拍照;細胞傳至第5代后，消化細胞，取6孔板，將細胞爬片置于6孔板內。取待用細胞緩慢滴加至細胞爬片上，覆蓋至整個爬片。將6孔板置于培養箱內37 °C繼續培養，隨后取出6孔板，光學顯微鏡下觀察爬片上的細胞貼壁是否良好，隨后可用于干細胞標記物免疫細胞熒光(ICC) 檢測；
(5)、細胞傳至第5代后，消化細胞，進行ALDEFLUOR細胞檢測。

[18]2、食管癌CSC干性維持及自我更新能力的檢測
貼壁培養的食管癌原代培養CSC細胞制成細胞懸液，15ml離心管lOOOr/min離心5min收集細胞，I XPBS洗細胞I次，再離心收集細胞，用干細胞培養基重懸細胞，調整細胞濃度至25個細胞/ml。
[19]初級細胞球培養:將重懸于干細胞培養基、細胞密度為25細胞/ml的原代培養CSC加于24孔超低吸附培養皿中，每孔加細胞懸液0.5ml，用于細胞微球拍照、計數和初級細胞球ALDHbri+Eso/ALDHlow-Eso百分比檢測；用于總RNA提取的細胞培養于在6孔超低吸附培養皿，每孔加細胞懸液Iml培養液，細胞密度為25個細胞/ml。其間，在第3天更換新鮮干細胞培養基，